1. 这款转染试剂能不能做稳转？

瞬转：质粒进去 → 不整合 → 几天就丢

稳转 = 稳定转染 / 稳定表达细胞株。稳转是 “整合 + 筛选” 的结果，不是试剂决定的。

就是把外源基因永久整合到细胞基因组里，让细胞能长期、稳定地表达这个基因，不会随着细胞传代而丢失。

质粒进去 → 随机整合进基因组 → 药物筛选留下阳性克隆，更多的是转染的只需要有整合原件和筛选抗性。

对于转染试剂来说，转染试剂只管 “把质粒送进细胞”，不管 “能不能稳转”。

2. 如何做稳转？

慢病毒、质粒与转座子系统均可将外源基因整合至宿主基因组，但三者的整合效率、操作方式及适用场景差异显著。慢病毒自带整合酶系统，能高效实现基因整合，

对多种细胞均有良好适配性；质粒 DNA 的整合概率极低（通常 < 1%），且高度依赖细胞类型；转座子系统（如 Sleeping Beauty、PiggyBac）则通过转座酶介导剪

切 - 粘贴机制，大幅提升整合效率，介于质粒随机整合与慢病毒之间。同时，想要实现稳转，质粒、转座子载体均需携带抗性基因，通过长期药物筛选淘汰未整合细

胞，其中质粒稳转成功率低且对细胞损伤较大，而转座子系统可显著提高阳性克隆获得率，无需构建病毒，操作更简便安全。所以，常规化学转染试剂（如脂质体、

PEI、磷酸钙）主要用于瞬时转染，若追求高效便捷且不愿操作病毒，转座子系统是构建稳转株的优质选择，而稳定转染最常用的方法仍是慢病毒感染。无论是质粒、

转座子还是慢病毒构建稳转细胞株，载体都需要含有抗性基因，后期通过一定时间的药物筛选，把没有转进目的基因的细胞杀死，保存下来的细胞都是成功整合了目

的基因、能够稳定遗传的细胞。

总结：

想简单高效、细胞难转 → 用慢病毒。

不想碰病毒、细胞好转（293、Hela 等） → 质粒转染 + 筛选。

想要稳定均一、适合发文章 → 转座子 或 CRISPR 定点整合。

3. 转染后通过什么方式检测表达？

检测方法取决于您的实验目的：

效率评估：若质粒带GFP等荧光标签，可在转染后24-48小时用荧光显微镜观察或流式细胞仪定量（最直观）。

mRNA水平：转染后24-48小时，提取RNA进行qRT-PCR。

蛋白水平：转染后48-72小时，裂解细胞进行Western Blot。注意：荧光强弱不代表目的蛋白表达量，WB才是金标准。

4. 转染过程中能不能加血清加抗生素？

血清：建议在复合物形成阶段（稀释转染试剂/DNA时）使用无血清培养基。形成后加入细胞时，可以含血清（多数血清不影响），但若细胞特别敏感，建议使用Opti-MEM等低血清培养基；

抗生素（如青霉素/链霉素）：对于大部分细胞来说不影响，但对于敏感细胞来说建议不要加。抗生素会增加细胞膜通透性导致细胞毒性，且会干扰后续的稳转筛选（如青霉素会竞争性抑制G418效果）

5. 转染试剂能不能放-20？

请务必查看说明书！

大多数脂质体转染试剂（如我们这款）：严禁冷冻。冷冻会破坏脂质体结构，导致团聚和效率丧失，必须4℃保存。

建议：若不慎冷冻，解冻后若出现沉淀或浑浊，请勿使用。

6. 转染试剂转染后需要换液吗？

视细胞状态和试剂毒性而定：

不需要换液：如果细胞状态良好（如HEK293、CHO细胞），转染后4-8小时无需换液，后续可根据培养基营养消耗情况及时补液或换液。

建议换液：如果细胞比较脆弱，建议转染后4-6小时更换为含血清的新鲜完全培养基，以降低脂质体毒性 。

7. 这款转染试剂的转染效率多少，毒性如何？

效率：在HEK293/CHO等常规细胞中，效率通常>80%（如GFP阳性率）；在难转染细胞中可能降至30%-60%，建议优化DNA/试剂比例。

毒性：我们的设计力求低毒，但肉眼可见的细胞死亡通常与DNA质量差、试剂用量过高或转染时细胞汇合度太低有关。建议梯度摸索最佳用量。

8. 转染效率很低，可能是什么原因？

请按以下清单排查：

细胞状态：细胞状态对于转染效率影响特别大，代数太高（>30代）或支原体污染（隐形杀手）是主因。转染时汇合度应在70%-90%。

DNA质量：OD260/280 应在1.8左右，且内毒素含量必须很低（内毒素会杀死细胞）。

复合物形成：转染复合物需室温静置10-15分钟，且不要 Vortex（涡旋振荡会破坏脂质体）

 9. 转染后细胞死了很多，怎么优化？

细胞状态：转染前细胞状态是否正常，转让前细胞状态不正常，转染后细胞更加容易死亡。

降低用量：按说明书最低推荐量进行梯度尝试（如0.5μl、1μl、2μl/孔）。

缩短作用时间：转染复合物加入细胞后，4小时后即可换液，不要过夜。

铺板密度：细胞融合度过低（<50%）时贴壁不牢，对毒性更敏感，提高转染时细胞密度。

10. 转染后细胞形态变了（变圆、漂浮），正常吗？

轻微变化：部分细胞在转染后出现轻微变圆或漂浮是正常现象（脂质体进入细胞时的应激反应），通常24小时后会恢复正常贴壁和伸展。

严重变化：若大面积漂浮且不贴壁，说明细胞毒性过高，请参考第9条进行优化，或立即换液

11. 转染试剂可以转染siRNA吗？

可以，说明书中有siRNA转染步骤，和质粒转染步骤不同，不需要enhancer；

12. 转染试剂可以转染mRNA吗？

可以，说明书中有mRNA转染步骤，和质粒转染步骤不同，不需要enhancer。而且效果非常好，产品详情页有案例。

13. siRNA的用量如何计算？

说明书中的20μM指的是20μM/L=20μM＝20μmol/L＝20nmol/mL＝20pmol/μL。24孔板每孔转20pmol的话，就是1μL；