品质最好的工具mRNA
随着mRNA技术的快速发展，越来越多的mRNA相关研究正在积极开展。为加速客户的研究进展，世途科推出一系列工具mRNA。通过优化UTR、密码子以及poly(A)结构，并在mRNA合成过程掺入Cap1帽子结构和N1-Me-pUTP，世途科确保工具mRNA兼具高品质和高表达的性能。
01
体外转录的 mRNA结构：
Nat Rev Drug Discov. 2021
体外转录的 mRNA 包含五个结构元件：一个 5' 帽（含 7 - 甲基鸟苷，通过三磷酸桥与 2'-O - 甲基化核苷相连）、两侧的 5' 和 3' 非翻译区（UTR）、开放阅读框（ORF）和聚腺苷酸尾（poly (A) tail）。
02
工具mRNA种类：
报告基因类：
| 产品名称 | 产品应用 |
| 产品编码 /NT0003 mCherry mRNA with N1-Me-pUTP(5'CAP) | 对照品:良好的转染对照品 药物递送:可以用于评估药物递送系统的效果;LNP 靶向性和递送效率的“金标准验证工具 体内成像:也用于体内成像研究。 |
| 产品编码 /NT0004 eGFP mRNA with N1-Me-pUTP5'CAP) | |
| 产品编码 /NT0005 Fluc mRNA with N1-Me-pUTP(5'CAP) | 递送系统评估与优化、疫苗开发:FlucmRNA转染细胞后，可检测荧光素酶活性适用于 mRNA 递送、翻译效率、细胞活力和体内成像等实验 |
| 产品编码 /NT0006 Fluc-eGFP mRNA with N1-Me-pUTP(5'CAP) | LNP载体性能测试、转染效率评估:FLuc-eGFP mRNA 体内翻译后，P2A 会被内源的蛋白酶切开从而表达出两个独立的蛋白(增强型绿色荧光蛋白 eGFP 和萤火虫荧光素酶蛋白 luciferase)，表达效果既可通过荧光显微镜观察 eGFP 荧光，也可以通过荧光素酶报告实验检测。该 mRNA 可用于细胞水平评估转染试剂的转染效率，也可用于动物水平评估递送载体的递送效果。 |
基因编辑类：
| 产品编码 /NT0007 Cas9 mRNA with N1-Me-pUTP(5'CAP) | 体内体外基因编辑、疾病模型构建:Cas9 作为 CRISPR 基因组编辑系统的一部分发挥 DNA 酶切作用。在 CRISPR 系统中Cas9 蛋白在特异性 SgRNA 的引导下到达基因组特定位点，对双链 DNA 进行切割产生 dsDNA 断裂。Cas9 mRNA 属于基因编辑类 mRNA，瞬时表达的基因编辑工具在体内停留时间短，可以减少免疫反应和基因编辑脱靶风险。 |
| 产品编码 /NT0008 Cre mRNA with N1-Me-pUTP(5'CAP) | 基因编辑与条件性基因操作：Cre(Cyclization RecombinationEnzyme)从 P1 噬菌体中发现，属于入Int酶超基因家族。Cre 能识别特异的 DNA序列，即 loxP 位点，使loxP 位点间的基因序列被删除或重组。Cre-loxP 系统主要用于基因敲除，也可根据 loxP 位点的位置和方向诱导 DNA 序列在两个 loxP 位点之间倒位和易位。目前 Cre-loxP 系统已广泛用于产生条件性基因表达/敲除/敲低小鼠。 |
抗原类：
| 产品编码 /NT0009 OVA mRNA with N1-Me-pUTP(5'CAP) | OVA mRNA with N1-MepUTP(5'CAP) 肿瘤免疫治疗与疫苗开发:OVA mRNA 表达的卵清蛋白(OVA)可被抗原呈递细胞(APC)加工为肽段 OVA .23- 33(OT-I转基因小鼠 CD4+T 细胞特异性识)和OVA 257-264(OT-|转基因小鼠 CD8+T 细胞特异性识别)分别激活 CD4 Th2 细胞和CD8*T细胞 免疫机制研究与疾病模型构建 过敏性疾病模型(如哮喘):自身免疫病 |
蛋白替代类：
| 产品编码 /NT0010 EPO mRNA with N1-Me-pUTP(5'CAP) | EPO mRNA withN1-Me-PUTP(5'CAP) 俬 血治疗机制探索:EPO mRNA 编码人类蛋白，在体内转染红细胞生成素(EPO告 mRNA 可显著增加网织红细胞计数和细胞比容 |
以上产品规格均分为100μg/1mg 两个规格。
N1-Me-pUTP是天然存在的假尿苷（pseudouridine，pUTP）的甲基化修饰产物。它是通过N1特异性假尿苷甲基转移酶（Nepl）催化生成的，可以显著增强mRNA的稳定性，同时这种修饰能够减少宿主细胞对mRNA的免疫反应，N1-Me-pUTP的加入还可以提高mRNA的翻译效率。5'CAP是指mRNA 5'端的帽子结构，是一种重要的转录后修饰。常见的帽子结构包括Cap0（m7GpppN）、Cap1（m7GpppNm）和Cap2（m7GpppNmNm）。帽子结构对mRNA来说至关重要，它不仅可与真核生物翻译起始因子(eIF4E)结合来启动翻译，而且还能保护mRNA不被核酸外切酶降解，同时可促使mRNA环化形成空间结构，增强稳定性。
03
工具mRNA品质：
完整度≥90%
用FA5200检测Fluc-eGFP mRNA完整性，完整度≥90%
加帽效率≥95%
用LC-MS检测Fluc-eGFP mRNA加帽率，加帽效率≥95%
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工具mRNA性能：
细胞铺板至24孔板，转染0.8μg eGFP mRNA with N1-Me-pUTP (5'CAP) #NT0004至细胞，转染后24h荧光显微镜拍照检测。以上结果为世途科转染试剂NanoTrans™ Transfection Reagent 3000 #CT0006的转染效果，NanoTrans™ Transfection Reagent 3000转染试剂mRNA转染性能远超目前市面上的mRNA转染试剂。
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相关产品推荐 - 转染试剂：
以上结果为世途科转染试剂NanoTrans™ Transfection Reagent 3000 #CT0006的转染效果，其中mRNA的转染性能远超目前市面上的mRNA转染试剂。
参考资料：
[1]. Chaudhary N, Weissman D, Whitehead KA. mRNA vaccines for infectious diseases: principles, delivery and clinical translation. Nat Rev Drug Discov. 2021 Nov;20(11):817-838.